體外診斷試劑原料專題

體外診斷是醫(yī)療器械行業(yè)的一個(gè)分支。在體外診斷領(lǐng)域檢測對象、方法學(xué)和技術(shù)路線眾多，新技術(shù)不斷涌現(xiàn)，但免疫檢測的方法一直是體外診斷領(lǐng)域最重要的技術(shù)。利用抗原、抗體的特異性反應(yīng)來檢測蛋白質(zhì)、激素等微量物質(zhì)，從20世紀(jì)60年代利用同位素，到20世紀(jì)80年代利用酶，再到20世紀(jì)90年代利用化學(xué)發(fā)光對檢測信號進(jìn)行放大，相關(guān)技術(shù)路線不斷演進(jìn)，超過了50年的歷史。最早以放射性核素作為標(biāo)記物的放射免疫檢測技術(shù)是美國醫(yī)學(xué)家耶洛和柏森于1959年建立的。標(biāo)記免疫檢測技術(shù)的發(fā)展極大地提高了免疫檢測方法的靈敏度，其后出現(xiàn)的非放射性核素如酶、元素、發(fā)光物和元素化合物標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)，使免疫檢測進(jìn)入到了自動(dòng)化檢測的時(shí)代。如今，免疫檢測方法已在臨床廣泛應(yīng)用于疾病篩查、診斷、治療監(jiān)測及預(yù)后評估等方面。

抗體、抗原是免疫檢測試劑核心反應(yīng)原材料，是體外診斷試劑質(zhì)量水平的重要決定因素，影響著體外診斷試劑靈敏度、特異性、穩(wěn)定性等各項(xiàng)性能。檢測特異性（assay specificity）是抗體僅對分析物產(chǎn)生可檢測性反應(yīng)的能力,交叉反應(yīng)性（cross-reactivity）與之相對，描述了抗體對分析物以外物質(zhì)的反應(yīng)能力。在免疫計(jì)量分析法的設(shè)計(jì)中，抗體對內(nèi)源性分析物的交叉反應(yīng)性（cross-reactivity）評估是必不可少的。許多蛋白質(zhì)具有與高度保守的表位密切相關(guān)的結(jié)構(gòu)。如果捕獲抗體或檢測抗體與交叉點(diǎn)反應(yīng)物結(jié)合，則檢測結(jié)果偏低；當(dāng)捕獲、檢測抗體均與交叉反應(yīng)物結(jié)合時(shí)，檢測結(jié)果偏高。影響免疫檢測的因素有很多，除了抗體的交叉反應(yīng)性還有：

1、抗體的物理掩蔽

抗體的物理掩蔽通常僅出現(xiàn)在固相抗體系統(tǒng)中，抗體包被在疏水聚合物為主的表面上。某些采血裝置中所用的脂質(zhì)和硅油有時(shí)會(huì)與固相產(chǎn)生非特異性結(jié)合，導(dǎo)致抗體物理掩蔽。

2、抗體結(jié)合位點(diǎn)構(gòu)像改變

由于樣本引起的反應(yīng)體系中離子強(qiáng)度或pH的變化，或者是由于預(yù)提取樣本時(shí)殘留的有機(jī)溶劑，抗體結(jié)合位點(diǎn)構(gòu)像可能發(fā)生改變。

3、嗜異性抗體（heterophilic antibodies）

人體樣本中的抗動(dòng)物IgG抗體可能與試劑抗體發(fā)生交叉反應(yīng)，特別是來自相同物種的試劑抗體，如小鼠單克隆抗體。嗜異性抗體與捕獲抗體和結(jié)合抗體的反應(yīng)可形成穩(wěn)定的、可檢測的抗體復(fù)合物，與分析物正常反應(yīng)形式的抗體復(fù)合物類似。

4、抗原構(gòu)像的改變

許多蛋白質(zhì)含有二價(jià)離子結(jié)合位點(diǎn)，血清或EDTA血漿中存在鎂或鈣離子，在溶液中一些藥物和其他半抗原與二價(jià)陽離子形成復(fù)合物，可能導(dǎo)致抗原構(gòu)像改變。

5、結(jié)合態(tài)分析物的置換

在檢測游離小分子（如甲狀腺素T4或三碘甲狀腺原氨酸T3）的時(shí)，如果某些物質(zhì)能夠?qū)⒔Y(jié)合態(tài)小分子從結(jié)合位點(diǎn)置換出來，就會(huì)干擾檢測結(jié)果。如非酯化脂肪酸在樣品儲(chǔ)存時(shí)，容易形成酯化脂肪酸，這類分析物就會(huì)使激素與蛋白結(jié)合點(diǎn)脫離，從而影響檢測。

6、低劑量鉤狀效應(yīng)（low-dose hook）

低劑量鉤狀效應(yīng)偶爾會(huì)在競爭性檢測法中遇到，特別是在那些放射性檢測法中，其抗原被標(biāo)記到一個(gè)非常高的比活性。對于低濃度分析物，抗原抗體結(jié)合可以超過零濃度時(shí)的結(jié)合。這種現(xiàn)象歸因于抗體對抗原的正協(xié)同結(jié)合。

7、高劑量鉤狀效應(yīng)（high-dose hook）

高劑量鉤狀效應(yīng)僅限于一步免疫計(jì)量分析法（夾心法），特點(diǎn)是在分析物濃度非常高時(shí)信號反而降低。這是由于分析物濃度過高，捕獲和檢測抗體同時(shí)飽和，阻止了可檢測的夾心復(fù)合物的形成。高劑量鉤狀效應(yīng)主要影響捕獲抗體濃度有限的固相檢測法和分析物濃度范圍非常寬的檢測法，如腫瘤標(biāo)志物的檢測。